试验目的                       

评估“蓝电”抗 PRRSV 效果。

试验内容                       

1. 确定“蓝电”对MARC-145细胞的安全药物浓度。

2. 评估“蓝电”对 PRRSV 的抑制作用。

3. 评估“蓝电”对 PRRSV 的杀灭作用。

4. 评估“蓝电”对 PRRSV 的阻断作用。

试验材料                       

1. 抗病毒药品：“蓝电”由河北征宇制药有限公司提供，主要成分：黄芪、板蓝根、金银花、蒲公英、大青叶、甘草。

3. 毒株与细胞株：PRRSV、Marc-145 细胞均由河北农业大学动物医学院预防兽医学实验室保存。

试验方法                       

将 Marc-145细胞接种于 96 孔细胞培养板中，待其生长成致密单层后，弃上清。用 DMEM 维持液将”蓝电“进行溶解稀释，再进行 2 倍倍比稀释，稀释终浓度分别为 100 000.0、50 000.0、25 000.0、12 500.0、6 250.0、3 125.0、1 562.5、781.3、390.6 和 195.3 mg/L，共 10 个稀释浓度。将各稀释浓度蓝电溶液分别加到已长有单层 Marc-145 细胞的培养板中，每孔 100 μL，每个稀释度重复 6 孔。另以病毒液接种细胞和DMEM 维持液加到细胞中分别作阳性对照和阴性对照，置于37 ℃ CO2 恒温细胞培养箱中培养，连续4 d 观察细胞病变情况，根据细胞病变情况确定蓝电对 Marc-145 细胞的毒性，以不出现细胞病变的最大蓝电溶液浓度为最大安全浓度。

将 Marc-145 细胞接种于 96 孔细胞培养板中，待其生长成致密单层后，弃上清。将 100×TCID50 PRRSV 病毒液接种于已长有单层 Marc-145细胞的 96 孔培养板中，每孔 100 μL，置于 37 ℃恒温培养箱中作用 2 h 后弃掉上清。将蓝电溶液从最大安全浓度（3 125mg/L）开始，倍比稀释成 10 个浓度，分别加到接种了 PRRSV 病毒液的 96 孔细胞培养板中，每孔 100 μL，每个稀释浓度重复 4 孔。另以病毒液接种细胞和 DMEM 维持液加到细胞中分别作阳性对照和阴性对照。置于 37 ℃ CO2 恒温细胞培养箱中培养，连续 4 d 观察细胞病变情况。

将200×TCID50 PRRSV 病毒液与从最大安全浓度开始进行的 2 倍倍比稀释成 10 个浓度的蓝电溶液等量混合，置 37 ℃恒温培养箱中作用 2 h 后，加入有单层 Marc-145 细胞的 96 孔细胞培养板中，每孔 100μL，重复 4 孔。另以病毒液接种细胞和 DMEM 维持液加到细胞中分别作阳性对照和阴性对照。置于37 ℃ CO2 恒温细胞培养箱中培养，连续 4 d 观察细胞病变情况。

4. “蓝电“对 PRRSV 的阻断作用测定：

试验结果                      

图 1  不同稀释浓度蓝电溶液下细胞生长情况（200×）

在蓝电溶液浓度 195.3 ～ 3 125.0 mg/L 时，均表现出较强的杀灭作用，细胞病变均低于 25％，从蓝电溶液浓度为 97.6 mg/L 开始，杀灭作用逐渐降低，但和只接PRRSV 病毒液的阳性细胞对照相比，仍表现出了杀灭作用；同时与表1中抑制作用结果相比，杀灭作用优于抑制作用。

表2  “蓝电”对 PRRSV 的杀灭作用细胞病变统计结果

蓝电溶液在24.4 mg/L~3 125.0 mg/L范围内对PRRSV具有阻断作用，在浓度低于12.2 mg/L时对PRRSV无阻断作用，整体来看，蓝电溶液对PRRSV的阻断作用低于抑制作用和杀灭作用。

表3  “蓝电”对 PRRSV 的阻断作用细胞病变统计结果

试验结论                

1.  “蓝电” 对PRRSV 的 防 控 有 显 著 效 果；最大安全浓度为3125 mg/L